在進行酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent  assay，ELISA）實驗中，有很多需要注意的地方，由于ELISA方法廣泛應(yīng)用在各種抗原和抗體的此定中。但是測定中的影響因素很多，并且對操作有較高的要求，所以，在實驗中除了正常的相互反應(yīng)，還會出現(xiàn)錯誤的反應(yīng)，導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

而造成這種錯誤的可能因素有：標(biāo)本因素；試劑因素；操作因素等。

為此，上海勁馬針對常見問題做分析如下：這里我簡單的總結(jié)一下：

ELISA 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作要點

無論在什么研究中，優(yōu)質(zhì)的試劑、良好的和正確的操作是保證ELISA 檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA  中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。

A  標(biāo)本的采取和保存

大部分ELISA  檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP 為標(biāo)記的ELISA  測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5  天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG  聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。

保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。