1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

常用的ELISA可以分為以下五大類：①直接ELISA；②間接ELISA；③夾心ELISA；④競(jìng)爭(zhēng)ELISA；⑤競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA。其他的ELISA都隸屬于這五類ELISA或由這五類ELISA組合衍生。 [2]

其方法是將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結(jié)果。直接ELISA操作很簡(jiǎn)單，步驟也比較簡(jiǎn)練，但是其應(yīng)用范圍還是非常有限的，一個(gè)重要的原因是這種ELISA中只經(jīng)過了一步信號(hào)放大（酶的放大），所以其靈敏度不是很高；另外，其測(cè)定的對(duì)象也非常有限，只能測(cè)定酶標(biāo)記的分子。

間接ELISA與直接ELISA不同的是，間接ELISA中與包被好的抗原結(jié)合的是非酶標(biāo)抗體，另外再引入第二種抗體（即二抗）。二抗是經(jīng)過酶標(biāo)的，它可以與第一種抗體特異性結(jié)合，最后加入底物顯色并判讀結(jié)果。由于二抗一般為多抗，因此，一個(gè)一抗分子上可以結(jié)合多個(gè)二抗分子，同時(shí)，一個(gè)二抗分子上可以標(biāo)記上多個(gè)酶分子，所以當(dāng)待測(cè)抗體為多抗時(shí)，信號(hào)經(jīng)過兩步放大，最終提高了檢測(cè)的靈敏度。另外，由于二抗制備比較容易，而且很早就開始商品化，所以操作者無需要將一抗進(jìn)行酶標(biāo)，大大縮減了工作量。在檢測(cè)抗體的效價(jià)、血清的效價(jià)以及單克隆抗體的篩選過程中，間接ELISA都是非常重要的實(shí)驗(yàn)過程，在臨床診斷中，間接ELISA也是檢測(cè)標(biāo)志性抗體的重要手段。

夾心ELISA總體上可以分為兩種，直接夾心ELISA和間接夾心ELISA。

直接夾心ELISA又分為雙抗體夾心ELISA和雙抗原夾心ELISA。

雙抗體夾心ELISA的方法是將第一種抗體（捕獲抗體）包被在固相載體上，封閉后加入待檢抗原，溫育后加入第二種抗體（檢測(cè)抗體），捕獲抗體和檢測(cè)抗體可以是針對(duì)不同表位的兩種單抗，也可以是針對(duì)同一抗原的一種單抗與一種多抗，但是檢測(cè)抗體需要經(jīng)過酶標(biāo)。

雙抗原夾心ELISA的原理和操作與雙抗體夾心ELISA基本相同，不同的是包被的是抗原，待檢對(duì)象是抗體，然后加入酶標(biāo)抗原，再加底物顯色。

對(duì)于雙抗體夾心ELISA，待檢對(duì)象必須包括兩個(gè)或者兩個(gè)以上的表位，否則檢測(cè)抗體無法與待檢抗原結(jié)合，例如半抗原和小分子抗原都是不能用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)的。對(duì)于雙抗原夾心ELISA，其操作與間接ELISA基本相同，但利用特異性的抗原代替酶標(biāo)二抗，所以特異性比間接法更好。另外，由于間接ELISA中使用的二抗一般只能識(shí)別IgG，而雙抗原夾心ELISA中任何類似的免疫球蛋白都可以被檢測(cè)出，因此，雙抗原夾心ELISA比間接ELISA也更靈敏。

間接夾心ELISA是基于兩種不同種屬來源的抗體的夾心ELISA，其原理是將一種種屬來源的特異性抗體包被于固相載體上（作為捕獲抗體），封閉，加入待檢抗原，溫育，洗滌后加入另一種種屬來源的特異性抗體（非酶標(biāo)，作為檢測(cè)抗體），最后加入酶標(biāo)二抗（特異性識(shí)別檢測(cè)抗體），再加底物顯色。與直接雙抗夾心ELISA相比，間接夾心ELISA中引入了特異性識(shí)別檢測(cè)抗體的酶標(biāo)二抗，相當(dāng)于整個(gè)體系的信號(hào)增加了一步放大系統(tǒng)，于是最終的結(jié)果比直接雙抗夾心ELISA更靈敏。同時(shí)，由于間接夾心ELISA中的酶標(biāo)二抗僅能識(shí)別檢測(cè)抗體，而不能識(shí)別捕獲抗體，所以體系的特異性也得到了保障。

本法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液；而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。這種方法所測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，因此，對(duì)小分子抗原如激素和藥物之類的測(cè)定常用此法。